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      多糖甲基化分析

      應用:廣泛應用于寡糖和多糖的結構測定。

      原理:該過程包括將多糖的單個組分糖衍生成部分甲基化的糖醇乙酸酯,并通過氣相色譜-質譜聯用分析和定量。


      即:多糖樣品中所有游離羥基都被甲基化---甲基化的多糖用三氟乙酸水解---部分甲基化的單糖被NaBH4還原---乙?;?/span>PMAAs---通過正確識別部分甲基化的糖醇乙酸酯,可以確定每個組成糖的連接位置。

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      重點及難點

        雖然這些方法已經很好地建立起來了,但是這個過程有許多技術方面的問題,要想成功地進行甲基化分析并正確地解釋所生成的數據,需要對細節的仔細關注和豐富的經驗。博睿糖生物在甲基化方面,已開發出了甲基化試劑盒,專供各種多糖使用。制備了全套甲基化試劑標準品,并開發出了博睿糖寡多糖甲基化糖苷鍵分析軟件,獲得計算機軟件著作權。針對中性糖、酸性糖以及氨基糖,均有一套完整、快速、精準的甲基化操作和分析流程。

      項目方案:

      中性糖和酸性糖甲基化方案不同,所以甲基化項目開始之前,需要客戶明確樣品是否為中性糖或酸性糖(明確方法可參考單糖組成分析項目)。中性糖甲基化分析:指的是單糖組成分析不含有半乳糖醛酸,葡萄糖醛酸,甘露糖醛酸,古羅糖醛酸的多糖。酸性糖甲基化分析:單糖組成分析中半乳糖醛酸,葡萄糖醛酸,甘露糖醛酸,古羅糖醛酸總和大于10%的多糖??蛻粜枰崆案嬷侵行蕴沁€是酸性糖。

      方案一:

      博睿糖甲基化試劑盒(貨號BRS050)??蛻舾鶕f明書,可自行制備樣品。簡化甲基化實驗試劑的復雜處理。

       方案二:

      博睿糖數據庫一次性比對服務??蛻艨蓪⒁呀洸杉降?/span>GCMS數據,與我公司的標準品數據圖庫進行比對分析,快速確定糖苷鍵種類,準確度完勝國外公共數據庫。

       方案三:

      博睿糖甲基化技術服務??蛻艨蓪悠肺形宜?,進行甲基化實驗及分析,根據客戶提供的單糖數據進行核對。給出糖苷鍵種類及比例。

      方案四:

      在甲基化之前需要進行糖醛酸還原實驗,工作量比是中性糖甲基化的2倍,由于含有大量的糖醛酸會影響甲基化試劑的親核取代反應。一般采用博睿糖生物的糖醛酸還原儀進行糖醛酸還原2-3周,最后離子色譜糖醛酸含量消失或者小于5%。均可以直接進行甲基化分析。根據客戶提供的單糖數據進行核對。給出糖苷鍵種類及比例。

      用量:

      中性糖甲基化方案:需要樣品量20-30mg凍干粉。

      酸性糖甲基化方案:需要樣品量100-150mg凍干粉。

      案例分析:

        多糖甲基化是解析單糖連接位置,也是最經典的多糖高級結構的分析方法。博睿糖生物采用博睿糖甲基化試劑盒,通過甲基化反應,游離羥基被甲基化后水解單糖殘基,將水解單糖的剩余羥基乙?;?。通過氣相質譜,根據博睿糖甲基化數據庫,結合NMR,分析單糖的位置和比例不同,推測此連接和重復結構。

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